生成可靠的HPLC结果的重要建议

HPLC在分析研究和质量控制实验室中有着显著的存在。关于制造过程和研究结果公布的重要决策都基于只有在HPLC系统产生的数据具有高度可靠性的情况下才能得出的决定。
 
HPLC是一个多组分系统,因此结果的准确性和可靠性取决于每个组分部分的性能水平。本文提供了一些有助于提高结果真实性的建议。为了简单起见,每个组成部分的贡献在单独的标题下讨论。
 
流动相
 
流动相的主要作用是将注入的样品携带到色谱柱中,并在色谱柱中分离后将单个组分转移到检测器中进行鉴定和定量。理想的情况下,应在开始分析和HPLC之前新鲜制备流动相应使用**溶剂。溶剂应该没有任何悬浮颗粒。**初使用0.45μ过滤器在真空下过滤溶剂。建议进一步使用在线过滤器来清除任何残留的悬浮颗粒。流动相溶剂应该完全相互混溶,注入的样品也应该混溶。当使用缓冲液作为流动相组分时,不要让缓冲液在系统内部干燥,因为在干燥时形成的盐会沉积并造成对流动相自由流动的阻碍,除了损坏泵组件。
 
样品
 
与流动相溶剂一样,在注射前过滤样品是一种很好的做法。大容量注射会导致峰形扭曲,因此不应通过大量注射来使色谱柱过载。每当开发新方法时,建议检查样品与流动相的兼容性。如果溶解度较低,请尝试使用与流动相混合物的极性相匹配的溶剂或溶剂组合。
 

 
 色谱柱是HPLC系统的关键组成部分。它的适当的照顾和使用将为提供高可靠性结果提供很大的帮助。
 
操作流量和压力应逐渐改变,以避免这种变化干扰固定相的包装。使用保护柱也可以防止杂质进入主柱。由于流动相的流量取决于温度,强烈建议使用柱温箱,以保持恒定的柱温以保持流速的一致性。
 

 
要求泵在整个分析过程中保持流动相的流动一致性并保持溶剂组成。在进行梯度分析的情况下,需要泵来按照软件程序维持流动相的组成。这样的条件是通过防止损坏泵部件并在注意到任何可见的损坏时及时更换这些部件来实现的。根据具体情况,通过允许冲洗中等极性溶剂或纯水来逐渐冲洗泵。
 
喷油器/自动进样器
 
注射量的一致性是结果重复性的首要需求。手动注射器由固定体积的样品环组成,在自动模式下,注射器保持体积的一致性,无需操作员干预。
 
需要特别注意防止以前的分析带来的污染。如果手动注射器总是用足够的样品冲洗注射环,并且在自动化系统的情况下确保中间洗涤周期是分析程序的一部分。在开始分析之前验证样品和标准可重复使用瓶的清洁度**关重要。
 
光源
 
大多数HPLC分析可以使用UV光源进行。这种光源具有有用的使用寿命。根据供应商的建议更换灯泡将有助于提高吸光度值的重复性。
 
探测器
 
检测器是HPLC系统的**终部分,它确认了不同样品成分的存在,并有助于量化。
 
建议将检测器定期清洗并不时脱机,并在重新使用前用水和流动相冲洗。切勿超过工作压力范围,以防止可能损坏检测器隔室壁。