亲和色谱

亲和色谱法是一种分离技术,其中混合物的成分基于它们对系统固定相的亲和力进行分离。

亲和色谱原理

  • 该色谱技术基于这样的原理:当对固定相具有亲和力的元素与固定相结合时,混合物的成分会分离。相反,其他组分则被流动相洗脱。
  • 底物/配体与固定相结合,从而暴露出用于结合组分的反应位点。
  • 现在,使混合物通过流动相,在该流动相中具有底物结合位点的组分与固定相上的底物结合,而其余组分则被流动相洗脱。
  • 然后通过改变pH值,离子强度或其他条件洗脱附着在固定相上的组分。
 

亲和层析的步骤

  • 通过用诸如琼脂糖或纤维素之类的固体支持物装载柱子来制备该柱子,带有间隔臂的底物/配体附着在其上。
  • 将包含混合物的流动相以恒定速率倒入色谱柱中。
  • 一旦该过程完成,通过改变有利于配体和混合物组分分离的条件,将配体-分子复合物从固定相上洗脱下来。

亲和色谱的用途

  • 亲和色谱法被用作从酶和其他蛋白质分离的主要方法。
  • 该原理也适用于体外抗原-抗体反应。
  • 该技术用于分离成分以及从混合物中去除杂质。
  • 亲和层析可用于检测核酸中的突变和核苷酸多态性。

亲和色谱的例子

  • 使用对氨基苯基-1-硫代-β-D-吡喃半乳糖基琼脂糖作为亲和基质,从蛋白质混合物中纯化大肠杆菌β-半乳糖苷酶。
  • 除去过量的白蛋白和α的2从血清白蛋白巨球蛋白。