反相色谱

反相色谱是一种液相色谱技术,其中分子的分离是通过液相流动相和固定相之间的疏水相互作用实现的。

反相色谱原理

  • 反相色谱法的原理是基于两个带有疏水基团的分子之间的相互作用。
  • 在此,固定相是同时带有疏水基团和亲水基团的固体载体。
  • 包含疏水区域的溶剂分子与疏水基团相互作用,从而将它们与具有亲水基团的分子分开。
  • 然后通过施加盐梯度递减的洗脱溶液使相互作用逆转,这将使具有疏水基团的分子与固定相分离。

反相色谱步骤

  • 用装有固体载体如硅胶的玻璃管制备该柱,在其上连接疏水基如苯基,辛基丁基。
  • 通过将混合物加入有机和无机溶剂的流动相中来制备样品。
  • 然后将样品从色谱柱顶部注入色谱柱。
  • 具有疏水基团的分子与固定相的疏水基团形成相互作用。相反,不具有此类基团的分子则通过流动相移出色谱柱。
  • 然后将具有减小的盐梯度的特定洗脱溶液送入色谱柱,该色谱柱从固定相中除去结合的分子。

反相色谱法的用途

  • 反向色谱法与高效液相色谱法的结合已越来越多地用于生物分子的分离。
  • 这也用于药物,代谢物和活性分子的分析研究中。
  • 它也可以用于去除各种环境样品中的杂质。

反相色谱的例子

  • 疏水相互作用色谱法是反相色谱法的一个例子,其中该技术用于从蛋白质混合物中分离蛋白质。
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