柱色谱的步骤

A.色谱柱的制备

  • 该柱主要由填充有合适固定相的玻璃管组成。
  • 在填充固定相之前,将玻璃棉/棉绒或石棉垫放在色谱柱的底部。
  • 包装后,将纸盘放在顶部,以免在引入样品或流动相时干扰固定层。

准备列有两种类型,它们是:

1.干包装/干灌装

在这种情况下,将所需量的吸附剂以干燥粉末的形式倒入色谱柱中,并使溶剂流过色谱柱直至达到平衡。

2.湿包装/湿填充

在这种情况下,制备具有流动相的吸附剂浆料并将其倒入塔中。被认为是包装的理想技术。

  • 在使用色谱柱之前,应正确洗涤并干燥。
  • 色谱柱也应无杂质,并用固定相均匀填充。

B.样本介绍

  • 通常是组分混合物的样品溶解在**少量的流动相中。
  • 整个样品立即被引入色谱柱,并被吸附在色谱柱的顶部。
  • 从该区域,可以通过洗脱过程分离单个样品。

C.洗脱

  • 通过洗脱技术,将各个成分从色谱柱中分离出来。
  • 它可以通过两种技术来实现:
  • 等度洗脱技术:在整个分离过程中,使用相同的溶剂组成或相同极性的溶剂。

例如。单独使用氯仿。

  • 梯度洗脱技术:在分离过程中使用逐渐具有↑极性或↑洗脱强度的溶剂。

例如,**初是苯,然后是氯仿,然后是乙酸乙酯,然后是氯仿

D.组件检测

  • 如果在柱色谱法中分离出的化合物是有色的,则可以简单地目视监测分离过程。
  • 从柱色谱分离的化合物是否无色。
  • 在这种情况下,将洗脱液的一小部分依次收集在标记的试管中,并通过TLC分析各组分的组成。