如何使您的色谱柱保持尖端形状

在谈论阑尾炎时,人们不会想到色谱法。但在不久的将来,一些医生可能会。事实证明,对于该病症的确定诊断的快速,简单和廉价的测试有**可能成为现实,部分原因在于柱色谱提供的分离。

波士顿研究人员利用液相色谱法分离患有腹痛的儿科患者尿液中的蛋白质,分离出富含亮氨酸的α-2-糖蛋白。患有阑尾炎的患者的水平比不患有阑尾炎的患者高100倍[1]。

该研究类似于**各地实验室中使用的许多基于蛋白质组学的方法。他们需要分离和分析数百个样本,以**终确定在疾病发展或正常过程中起作用的确切蛋白质。

这些努力的核心是色谱柱,具有各种形式。将色谱柱保持在**佳状态将不仅可以改善和标准化分离,还可以确保色谱柱的使用寿命。以下是您可以采取的一些措施来实现这一目标。

一点点TLC

与任何投资一样,如房屋或汽车,您可以通过应用一些优秀的老式TLC,通过预先填充的柱子进一步赚钱。

“如果你从一开始就经常保养和清洁,那么[专栏]会持续更长时间,” Life Technologies公司色谱产品经理Paul Lynch说  。“一旦崩溃,那么你将很难恢复表现。”

清洁色谱柱所需的溶剂,酸和/或碱类型取决于其设计和吸附剂的具体类型。虽然有些色谱柱需要氢氧化钠,但溶液会损坏其他色谱柱中的吸附剂。按照列附带的说明进行操作。

但这不仅仅是清洁。储存条件也很重要。

“许多人不会考虑如何储存色谱柱,” Bio-Rad Laboratories实验室色谱**产品经理Shawn Anderson说  。

细菌在缓冲液的中性环境中茁壮成长。通过柱子流水来防止细菌生长。然后,地点列抑菌溶液,如含有20%乙醇,并在4的冷藏库的那些Ò ℃到8 Ò C,他说。

安德森还建议在您**次使用时注意色谱柱的背压。如果背压随着时间的推移而增加,那么你就不能清洁它了。或者,您可以使用Bio-Rad的一种NGC色谱系统,该系统可自动记录初始背压,并可防止色谱柱过压。

**先过滤

如果您将外来颗粒和污染物留在海湾,您可以使原始条件下的色谱柱保持更长时间。这意味着使用一种或多种不同的过滤器或膜,使盐,纤维和其他不属于的物质的量**小化。

“在延长分析柱寿命方面,任何可以通过某些过滤步骤移出的颗粒都能很好地发挥作用,” Thermo Fisher Scientific液相色谱产品经理Dafydd Milton说  。

Milton建议在将样品注入更昂贵的分析柱本身之前,通过较粗的色谱柱(例如捕集柱)运行样品。这样做不仅可以保持分析柱清洁,而且可以浓缩样品,这意味着您可以使用更多的样品,从而产生更好的灵敏度。

公司提供各种过滤解决方案 例如,Thermo Fisher Scientific提供了一系列捕获柱,可保留不同大小的肽和蛋白质。该公司的二氧化钛纳米捕集柱通过保留其他所有物质并允许磷酸化肽在洗脱液中通过而浓缩样品中的磷酸化肽。

Phenomenex提供用于HPLC,UHPLC和制备柱的SecurityGuard保护柱。作为过滤器或捕集柱,这些滤芯填充有吸附剂,可吸留颗粒和其他污染物。

Phenomenex的生物分离产品经理Michael McGinley也建议保持在不同色谱柱的建议pH和温度范围内。

“当你走到范围边缘时,你可能会损坏硅树脂,”麦金利说。“这只是监控......要求的问题。”

在分离期间将缓冲区添加到列之前,还应考虑过滤缓冲区。

生活必需品

为了方便预装柱,许多研究人员拒**支付费用并坚持自己包装。

“预装柱的主要问题是它们非常昂贵,”哈佛医学院病理学副教授Hanno Steen说,他是上述阑尾炎研究的主要贡献者。“它们的价格在500美元到1000美元之间,而内部列的价格要低得多。”

斯蒂恩估计,购买预装柱的成本大约是包装自己的10倍。更大,更专业的分析柱可以承受1,000到2,000美元的价格标签,而较大的色谱柱,例如商业上用于净化药物的色谱柱,可以从那里上升。

在Steen的实验室中,大多数柱色谱用自制色谱柱进行,并且密切监测预装柱的使用情况。使用用户名记录每列的使用情况。使用预装柱的实验室成员比其他人更频繁地被标记并检查他们对昂贵设备的处理。

McGinley说,当你考虑到材料的高价格,专业机械和生产预装柱所需的人力时,成本并不是真正的奢侈。

“每个人都认为包装只是将粉末装入管中,”他说。“实际上,包装媒体以获得高性能是一项非常复杂的科学,需要大量的方法开发和设计开发。”

打包他们

尽管如此,斯蒂恩倾向于支持实验室填充的柱子 - 而且不仅仅是出于经济原因。

“商业填充柱的问题之一是它们具有较低的灵活性。你被他们所拥有的东西困住了,“他说。相比之下,实验室填充的色谱柱可以定制。“这就是内部专栏的美妙之处。”

斯蒂恩喜欢自由地使用个人选择的材料 - 无论是新颖的还是传统的 - 来填充列,而不是仅限于供应商的目录列表。

另一方面,Steen确实认识到预装柱提供的再现性。因此,他倾向于在进行质谱研究时打包自己的色谱柱,从而产生定性结果,并使用预装柱进行定量分析。

Life Technologies的Lynch同意,当您**次支付预装柱时,预算会受到影响。但是,他认为,“考虑所有节省的时间”,因为“您需要更少的步骤来完成[预填充色谱柱]的研究。人们总是迷失方向。“

无论您的研究预算是大还是小,当您选择预填充或自制的色谱柱时,蛋白质分离将**有可能成功 - 具有**适合您的蛋白质样品和目标的规格。解决整个过程中的所有细节,包括保养和清洁色谱柱,将有助于您完成重要发现。

参考

[1] Kentsis,A,et al。,“尿液中富含亮氨酸的α-2-糖蛋白在疑似急性阑尾炎患儿中的检测和诊断价值”,Ann Emerg Med,60(1):78-83.e1,2012 。[ PubMed ]